Jedan svijet jedna borba
─Međunarodna suradnja za izgradnju globalne zajednice zajedničke sudbine koja odgovara na izazov pandemije COVID-19
Novi koronavirus koji je zahvatio svijet rezultirao je kontinuiranom globalnom krizom pandemije COVID-19.Novi koronavirus nema granica, niti jedna zemlja neće biti pošteđena ove bitke protiv COVID-19.Kao odgovor na ovu svjetsku pandemiju COVID-19, Liming Bio-Products Corp daje doprinos za podršku dobrobiti naših globalnih zajednica.
Naš je svijet trenutno suočen s neviđenim utjecajem pandemije nove bolesti koronavirusa 2019. (COVID-19).Do danas ne postoji učinkovit lijek za liječenje ove bolesti.Međutim, razvijeni su mnogi dijagnostički testovi za otkrivanje COVID-19.Ovi se testovi temelje na molekularnim ili serološkim metodama za otkrivanje novih biomarkera nukleinske kiseline ili antitijela specifičnih za koronavirus.Kako je COVID-19 dosegao status pandemije, rana dijagnoza nove infekcije koronavirusom ključna je za procjenu širenja virusa i njegovo suzbijanje, ali savršen test za univerzalnu upotrebu još ne postoji.Moramo znati koji se testovi potencijalno mogu koristiti za probir, dijagnozu i praćenje infekcije COVID-19 te koja su njihova ograničenja.Vrlo je važno kako bolje iskoristiti ove znanstvene alate i pomoći identificirati i kontrolirati pojavu ove ozbiljne bolesti koja se brzo širi.
Svrha otkrivanja novog koronavirusa je utvrditi ima li osoba koja ima infekciju COVID-19 ili asimptotski nositelj koji može tiho širiti virus, kako bi se pružile bitne informacije za usmjeravanje donošenja odluka o kliničkom liječenju.Prethodne studije su pokazale da 70% kliničkih odluka ovisi o rezultatima testiranja.Kada se koriste različite metode detekcije, zahtjevi kompleta reagensa za detekciju također su različiti.
Slika 1
Slika 1:Dijagram koji prikazuje ključne faze općih razina biomarkera tijekom tipičnog vremenskog tijeka infekcije COVID-19.Os X označava broj dana infekcije, a os Y virusno opterećenje, koncentraciju antigena i koncentraciju antitijela u različitim razdobljima.Antitijelo se odnosi na IgM i IgG antitijela.I RT-PCR i otkrivanje antigena koriste se za otkrivanje prisutnosti ili odsutnosti novog koronavirusa, što je izravan dokaz za rano otkrivanje pacijenata.Unutar tjedan dana nakon virusne infekcije, PCR detekcija ili detekcija antigena je poželjna.Nakon infekcije novim koronavirusom oko 7 dana, IgM protutijelo protiv novog koronavirusa postupno se povećava u krvi bolesnika, ali trajanje postojanja je kratko, a njegova koncentracija brzo opada.Nasuprot tome, IgG antitijelo protiv virusa pojavljuje se kasnije, obično oko 14 dana nakon infekcije virusom.Koncentracija IgG postupno raste, te se dugo zadržava u krvi.Dakle, ako je IgM otkriven u krvi pacijenta, to znači da je virus nedavno zaražen, što je rani marker infekcije.Kada se u krvi pacijenta otkrije IgG antitijelo, to znači da je virusna infekcija već neko vrijeme.Također se naziva kasna infekcija ili prethodna infekcija.Često se viđa kod pacijenata koji su u fazi oporavka.
Biomarkeri novog koronavirusa
Novi koronavirus je RNA virus koji se sastoji od proteina i nukleinskih kiselina.Virus napada (ljudsko) tijelo domaćina, ulazi u stanice preko mjesta vezanja odgovarajućeg receptora ACE2 i replicira se u stanicama domaćina, uzrokujući da ljudski imunološki sustav reagira na strane napadače i proizvodi specifična antitijela.Stoga se nukleinske kiseline i antigeni u bočici te specifična antitijela protiv novog koronavirusa teoretski mogu koristiti kao specifični biomarkeri za otkrivanje novog koronavirusa.Za detekciju nukleinskih kiselina najčešće se koristi RT-PCR tehnologija, dok se serološke metode obično koriste za otkrivanje novih antitijela specifičnih za koronavirus.Trenutno su dostupne razne metode testiranja koje možemo odabrati za testiranje infekcije COVID-19 [1].
Osnovni principi glavnih metoda ispitivanja na novi koronavirus
Do sada su dostupni mnogi dijagnostički testovi za COVID_19, a svaki dan sve više testnih kompleta dobiva odobrenje za korištenje u hitnim slučajevima.Iako novi razvoji testova dolaze s toliko različitih imena i formata, svi trenutni testovi COVID_19 u osnovi se oslanjaju na dvije glavne tehnologije: otkrivanje nukleinske kiseline za virusnu RNA i serološke imunološke analize koje otkrivaju virusno specifična antitijela (IgM i IgG).
01. Detekcija nukleinske kiseline
Lančana reakcija reverzne transkripcije-polimeraze (RT-PCR), izotermna amplifikacija posredovana petljom (LAMP) i sekvenciranje sljedeće generacije (NGS) uobičajene su metode nukleinskih kiselina za otkrivanje nove RNA koronavirusa.RT-PCR je prva vrsta testa za COVID-19, koju preporučuju i Svjetska zdravstvena organizacija (WHO) i američki centar za kontrolu i prevenciju bolesti (CDC).
02.Serološka detekcija antitijela
Antitijelo je zaštitni protein koji se proizvodi u ljudskom tijelu kao odgovor na infekciju virusom.IgM je rani tip antitijela, dok je IgG kasniji tip antitijela.Uzorak seruma ili plazme obično se ispituje na prisutnost specifičnih IgM i IgG tipova antitijela za procjenu akutne i rekonvalescentne faze infekcije COVID-19.Ove metode detekcije temeljene na antitijelima uključuju imunokromatografiju koloidnog zlata, imunokromatografiju s lateksom ili fluorescentnom mikrosferom, enzimski imunosorbentni test (ELISA) i test kemiluminiscencije.
03.Detekcija virusnog antigena
Antigen je struktura na virusu koju prepoznaje ljudsko tijelo i koja pokreće imunološki obrambeni sustav da proizvodi antitijela za uklanjanje virusa iz krvi i tkiva.Virusni antigen prisutan na virusu može se ciljati i detektirati korištenjem imunološkog testa.Poput virusne RNA, virusni antigeni su također prisutni u respiratornom traktu zaraženih osoba i mogu se koristiti za dijagnosticiranje akutne faze infekcije COVID-19.Stoga se često preporuča uzimanje uzoraka gornjih dišnih puteva kao što su slina, nazofaringealni i orofaringealni brisevi, ispljuvak dubokog kašlja, tekućina za bronhoalveolarno ispiranje (BALF) za početno testiranje na antigen.
Odabir metoda testiranja na novi koronavirus
Odabir metode ispitivanja uključuje mnoge čimbenike, uključujući kliničko okruženje, kontrolu kvalitete ispitivanja, vrijeme obrade, troškove ispitivanja, metode prikupljanja uzoraka, tehničke zahtjeve laboratorijskog osoblja, zahtjeve za objekte i opremu.Detekcija nukleinskih kiselina ili virusnih antigena mora pružiti izravan dokaz o prisutnosti virusa i potvrditi dijagnozu nove infekcije koronavirusom.Iako postoji mnogo metoda za detekciju antigena, njihova je osjetljivost na detekciju novog koronavirusa teoretski niža od one RT-PCR amplifikacije.Testiranje antitijela je otkrivanje antivirusnih antitijela proizvedenih u ljudskom tijelu, koja kasne u vremenu i često se ne mogu koristiti za rano otkrivanje tijekom akutne faze virusne infekcije.Klinička postavka za primjenu detekcije može varirati, a mjesta za prikupljanje uzoraka također mogu biti različita.Za otkrivanje virusnih nukleinskih kiselina i antigena, uzorak se mora uzeti u respiratornom traktu gdje je virus prisutan, kao što su brisevi nazofarinksa, orofaringealni brisevi, sputum ili tekućina za bronhoalveolarno ispiranje (BALF).Za otkrivanje na temelju antitijela potrebno je uzeti uzorak krvi i ispitati ga na prisutnost specifičnih antivirusnih protutijela (IgM/IgG).Međutim, rezultati ispitivanja antitijela i nukleinske kiseline mogu se međusobno nadopunjavati.Na primjer, kada je rezultat testiranja negativan na nukleinsku kiselinu, negativan na IgM, ali IgG-pozitivan, ovi rezultati ukazuju na to da pacijent trenutno ne nosi virus, ali se oporavio od nove infekcije koronavirusom.[2]
Prednosti i nedostaci novih testova na koronavirus
U Protokolu o dijagnostici i liječenju nove pneumonije od koronavirusa (probna verzija 7) (objavila Nacionalna zdravstvena komisija i državna uprava za tradicionalnu kinesku medicinu 3. ožujka 2020.), testiranje nukleinske kiseline koristi se kao metoda zlatnog standarda za dijagnozu novog. infekcije koronavirusom, dok se testiranje na antitijela također smatra jednom od metoda potvrde dijagnoze.
Patogeni i serološki nalazi
(1) Patogeni nalazi: Nova nukleinska kiselina koronavirusa može se otkriti u brisevima nazofarinksa, sputumu, izlučevinama donjih dišnih puteva, krvi, izmetu i drugim uzorcima pomoću RT-PCRand/ili NGS metoda.Točnije je ako se uzorci uzimaju iz donjih dišnih puteva (sputum ili ekstrakcija zračnog trakta).Uzorke treba dostaviti na ispitivanje što je prije moguće nakon uzimanja.
(2) Serološki nalazi: IgM specifičan za NCP virus postaje detektabilan oko 3-5 dana nakon početka;IgG postiže titraciju od najmanje 4 puta povećanja tijekom rekonvalescencije u usporedbi s akutnom fazom.
Međutim, odabir metoda ispitivanja ovisi o zemljopisnom položaju, medicinskim propisima i kliničkim uvjetima.U SAD-u je NIH izdao Smjernice za liječenje bolesti korona virusa 2019. (COVID-19) (stranica ažurirana: 21. travnja 2020.), a FDA je izdala Politiku za dijagnostičke testove za bolest korona virusa-2019 tijekom hitne situacije u javnom zdravstvu (objavljena 16. ožujka 2020.). ), u kojem je serološko ispitivanje IgM/IgG protutijela odabrano samo kao test probira.
Metoda detekcije nukleinske kiseline
RT_PCR je vrlo osjetljiv test nukleinske kiseline dizajniran za otkrivanje je li nova RNA koronavirusa prisutna u respiratornom ili drugom uzorku.Pozitivan rezultat PCR testa znači prisutnost nove RNA koronavirusa u uzorku za potvrdu infekcije COVID-19.Negativan rezultat PCR testa ne znači odsutnost virusne infekcije jer bi na nju mogla utjecati loša kvaliteta uzorka ili vremenska točka bolesti u fazi oporavka, itd.Iako je RT-PCR vrlo osjetljiv test, ima nekoliko nedostataka.RT-PCR testovi mogu biti radno intenzivni i dugotrajni, što uvelike ovisi o visokoj kvaliteti uzorka.To može biti izazov jer količina virusne RNA ne samo da jako varira među različitim pacijentima, već može varirati i unutar istog pacijenta ovisno o vremenskim točkama kada se uzorak prikuplja, kao i o fazama infekcije ili pojavi kliničkih simptoma.Za otkrivanje novog koronavirusa potrebni su visokokvalitetni uzorci koji sadrže dovoljnu količinu netaknute virusne RNA.
RT-PCR test može dati netočan negativan rezultat (lažno negativan) za neke pacijente koji imaju infekciju COVID-19.Kao što znamo, glavna mjesta infekcije novim koronavirusom nalaze se u plućima i donjem respiratornom traktu, poput alveola i bronha.Stoga se smatra da uzorak sputuma iz dubokog kašlja ili tekućina za bronhoalveolarno ispiranje (BALF) ima najveću osjetljivost za otkrivanje virusa.Međutim, u kliničkoj praksi uzorci se često uzimaju iz gornjih dišnih puteva pomoću nazofaringealnih ili orofaringealnih briseva.Sakupljanje ovih uzoraka nije samo neugodno za pacijente, već zahtijeva i posebno obučeno osoblje.Kako bi uzimanje uzoraka bilo manje invazivno ili lakše, u nekim slučajevima pacijentima se može dati oralni bris i omogućiti im da sami uzmu uzorak sluznice usne ili jezika.Bez dovoljno virusne RNA, RT-qPCR može dati lažno negativan rezultat testa.U provinciji Hubei, Kina, RT-PCR osjetljivost u početnoj detekciji prijavljena je samo oko 30% -50%, s prosjekom od 40%.Visoka stopa lažno negativnih najvjerojatnije je uzrokovana nedovoljnim uzorkovanjem.
Osim toga, RT-PCR test zahtijeva visoko obučeno osoblje za izvođenje složenih koraka ekstrakcije RNA i postupka PCR amplifikacije.Također zahtijeva višu razinu zaštite biološke sigurnosti, poseban laboratorij i PCR instrument u stvarnom vremenu.U Kini, RT-PCR test za otkrivanje COVID-19 potrebno je provesti u laboratorijima razine 2 biološke sigurnosti (BSL-2), uz zaštitu osoblja primjenom prakse razine biološke sigurnosti 3 (BSL-3).Prema ovim zahtjevima, od početka siječnja do početka veljače 2020., kapacitet laboratorija CDC u China Wuhanu mogao je otkriti samo nekoliko stotina slučajeva dnevno.Normalno, to ne bi bio problem kod testiranja drugih zaraznih bolesti.Međutim, kada se suočavamo s globalnom pandemijom kao što je COVID-19 s potencijalno milijunima ljudi za testiranje, RT-PCR postaje kritično pitanje zbog svojih zahtjeva za posebnim laboratorijskim objektima ili tehničkom opremom.Ovi nedostaci mogu ograničiti RT-PCR da se koristi kao učinkovito sredstvo za probir, a također mogu dovesti do kašnjenja u izvješćima o rezultatima testiranja.
Serološka metoda detekcije antitijela
S napredovanjem tijeka bolesti, osobito u srednjoj i kasnoj fazi, stopa otkrivanja antitijela je vrlo visoka.Studija u Srednjoj južnoj bolnici Wuhan pokazala je da bi stopa otkrivanja antitijela mogla doseći više od 90% u trećem tjednu infekcije COVID-19.Također, antitijelo je proizvod ljudskog imunološkog odgovora na novi koronavirus.Test na antitijela nudi nekoliko prednosti u odnosu na RT-PCR.Prvo, serološki testovi na antitijela su jednostavni i brzi.Testovi bočnog protoka antitijela mogu se koristiti za pružanje njege za 15 minuta.Drugo, cilj otkriven serološkim testom je antitijelo, za koje se zna da je mnogo stabilnije od virusne RNA.Tijekom prikupljanja, transporta, skladištenja i testiranja, uzorci za testove na antitijela općenito su stabilniji od uzoraka za RT-PCR.Treće, budući da je protutijelo ravnomjerno raspoređeno u cirkulaciji krvi, manje su varijacije uzorkovanja u usporedbi s testom nukleinske kiseline.Volumen uzorka potreban za test antitijela je relativno mali.Na primjer, 10 mikrolitara krvi iz prsta dovoljno je za korištenje u testu bočnog protoka antitijela.
Općenito, test antitijela je odabran kao dodatak za otkrivanje nukleinske kiseline kako bi se poboljšala stopa otkrivanja novog koronavirusa tijekom tijekova bolesti.Kada se test na antitijela koristi zajedno s testom nukleinske kiseline, može povećati točnost analize za dijagnozu COVID-19 smanjenjem potencijalnih lažno pozitivnih i lažno negativnih rezultata.Trenutni vodič za rad ne preporučuje korištenje dvije vrste testa odvojeno kao neovisnog formata za otkrivanje, već bi se trebao koristiti kao kombinirani format.[2]
Slika 2:Ispravno tumačenje rezultata testa nukleinske kiseline i antitijela za otkrivanje nove infekcije koronavirusom
Slika 3:Liming Bio-Products Co., Ltd. – Komplet za brzo testiranje novog IgM/IgG antitijela na koronavirus (StrongStep®Brzi test na SARS-CoV-2 IgM/IgG antitijela, lateks imunokromatografija)
Slika 4:Liming Bio-Products Co., Ltd. – StrongStep®Novi Coronavirus (SARS-CoV-2) Multiplex PCR kit u stvarnom vremenu (detekcija za tri gena, metoda fluorescentne sonde).
Bilješka:Ovaj vrlo osjetljiv, spreman za korištenje PCR komplet dostupan je u liofiliziranom formatu (postupak sušenja zamrzavanjem) za dugotrajno skladištenje.Komplet se može transportirati i čuvati na sobnoj temperaturi i stabilan je godinu dana.Svaka epruveta premiksa sadrži sve reagense potrebne za PCR amplifikaciju, uključujući reverznu transkriptazu, Taq polimerazu, primere, sonde i dNTPs supstrate. Korisnici mogu jednostavno rekonstituirati smjesu dodavanjem vode za PCR zajedno s predloškom i zatim učitavanjem na PCR instrument za pokretanje amplifikacije.
Kao odgovor na novu epidemiju koronavirusa, Liming Bio-Products Co., Ltd. brzo je radio na razvoju dva dijagnostička kompleta kako bi omogućili kliničkim i javnozdravstvenim laboratorijima da brzo dijagnosticiraju infekciju COVID-19.Ovi kompleti su vrlo prikladni za korištenje za široke probire u zemljama i regijama u kojima se epidemija novog koronavirusa brzo širi, te za postavljanje dijagnoze i potvrde infekcije COVID-19.Ovi kompleti su za korištenje samo pod prethodno obaviještenom autorizacijom za hitne slučajeve (PEUA).Ispitivanje je ograničeno na laboratorije certificirane prema propisima nacionalnih ili lokalnih vlasti.
Metoda detekcije antigena
1. Detekcija virusnog antigena klasificira se u istu kategoriju izravne detekcije kao i detekcija nukleinske kiseline.Ove metode izravne detekcije traže dokaze o virusnim patogenima u uzorku i mogu se koristiti za potvrdu dijagnoze.Međutim, razvoj kompleta za detekciju antigena zahtijeva visoku kvalitetu monoklonskih antitijela s jakim afinitetom i visokom osjetljivošću koja su sposobna prepoznati i uhvatiti patogene viruse.Obično je potrebno više od šest mjeseci da se odabere i optimizira monoklonsko protutijelo prikladno za upotrebu u pripremi kompleta za detekciju antigena.
2. Trenutno su reagensi za izravno otkrivanje novog koronavirusa još uvijek u fazi istraživanja i razvoja.Stoga, nijedan komplet za otkrivanje antigena nije klinički validiran i komercijalno dostupan.Iako je ranije objavljeno da je dijagnostička tvrtka u Shenzhenu razvila komplet za otkrivanje antigena i klinički testirana u Španjolskoj, pouzdanost i točnost analize nisu se mogli potvrditi zbog prisutnosti problema s kvalitetom reagensa.Do danas, NMPA (bivša kineska FDA) još nije odobrila nijedan komplet za detekciju antigena za kliničku upotrebu.Zaključno, razvijene su različite metode detekcije.Svaka metoda ima svoje prednosti i ograničenja.Rezultati različitih metoda mogu se koristiti za provjeru i dopunu.
3. Izrada kvalitetnog kompleta za testiranje na COVID-19 uvelike ovisi o optimizaciji tijekom istraživanja i razvoja.Liming Bio-Product Co., Ltd.testni setovi moraju zadovoljiti stroge standarde proizvodnje i kontrole kvalitete kako bi se osiguralo da pružaju najvišu razinu performansi i dosljednosti.Znanstvenici u Liming Bio-Product Co., Ltd. imaju više od dvadeset godina iskustva u dizajniranju, testiranju i optimizaciji in vitro dijagnostičkih kompleta kako bi se osigurala najviša razina performansi u analitičkoj kvantifikacije.
Tijekom pandemije COVID-19 kineska vlada suočila se s porastom ogromne potražnje za materijalima za prevenciju epidemije na međunarodnim žarištima.Dana 5. travnja, na konferenciji za novinare Zajedničkog mehanizma za prevenciju i kontrolu Državnog vijeća "Jačanje upravljanja kvalitetom medicinskih materijala i reguliranje poretka na tržištu", Jiang Fan, inspektor prve razine Odjela za vanjsku trgovinu Ministarstva Commercea, rekao je: "Sljedeće ćemo usredotočiti naše napore na dva aspekta, prvo, da ubrzamo potporu više medicinskih zaliha potrebnih međunarodnoj zajednici, a također i da poboljšamo kontrolu kvalitete, regulaciju i upravljanje proizvodima. Dat ćemo doprinos Kine zajedničkom odgovoru na globalnu epidemiju i izgradnji zajednice sa zajedničkom budućnošću za čovječanstvo.
Slika 5:Novi reagens za koronavirus Liming Bio-Products Co., Ltd. dobio je certifikat o registraciji EU CE
Počasno priznanje
Houshenshan
Slika 6. Liming Bio-Products Co., Ltd. podržao je gorsku bolnicu Wuhan Vulcan(HouShenShan) u borbi protiv epidemije COVID-19 i dobio je počasnu potvrdu Crvenog križa Wuhan.Planinska bolnica Wuhan Vulcan najpoznatija je bolnica u Kini koja je specijalizirana za liječenje teških pacijenata s COVID-19.
Kako se nova epidemija koronavirusa nastavlja širiti svijetom, Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd. pojačava podršku i pomaže zajednicama diljem svijeta s našim inovativnim tehnologijama u borbi protiv ove globalne prijetnje bez presedana.Brzo testiranje na infekciju COVID-19 kritičan je dio rješavanja ove prijetnje.Nastavljamo značajno doprinositi pružanjem visokokvalitetnih dijagnostičkih platformi u ruke zdravstvenih radnika kako bi ljudi mogli dobiti kritične rezultate testiranja koji su im potrebni.Napori Liming Bio-products Co., Ltd. u borbi protiv pandemije COVID-19 su da svojim tehnologijama, iskustvima i stručnosti doprinesemo međunarodnim zajednicama za izgradnju globalne zajednice sudbine.
Dugo pritisnite ~Skeniraj i slijedite nas
e-pošta: sales@limingbio.com
Web stranica: https://limingbio.com
Vrijeme objave: 01.05.2020
